profoldin VRT100K簡介

病毒 RNA 依賴性 RNA 聚合酶試驗是使用黃病毒科（陽性、單鏈、包膜 RNA 病毒家族）中的 RNA 聚合酶開發(fā)的。該測定法基于在存在 NTP 的情況下，以 RNA 為模板，測定由 RNA 聚合酶合成的 RNA 分子。該試驗可在 384 孔或 96 孔板中進行，用于檢測黃病毒科 RNA 聚合酶的酶活性和高通量篩選抑制劑。

病毒 RNA 依賴的 RNA 聚合酶檢測試劑盒-100（目錄號VRT100K）包括 350µl 10 x 緩沖液、33µl 100 x 模板、33µl 100 xNTP（50 mM ATP 和 50 mM GTP）和 330µl 10 x 熒光染料。用于 384 孔板中病毒 RNA 聚合酶的 100 次測定。檢測試劑盒包括除酶以外的所有試劑。

病毒 RNA 依賴的 RNA 聚合酶檢測試劑盒-500（目錄號VRT500K）包括 1550µl 10 x 緩沖液、160µl 100 x 模板、160µl 100 xNTP（50 mM ATP 和 50 mM GTP）和 1550µl 10 x 熒光染料。用于 384 孔板中病毒 RNA 聚合酶的 500 次測定。檢測試劑盒包括除酶以外的所有試劑。

參考文件

Shu Yang 等人，Emetine 通過抑制病毒復制和減少病毒進入兩種分子機制抑制寨卡和埃博拉病毒感染，Cell Discovery，第 4 卷，貨號：31，（2018 年 6 月 5 日）。

試驗方案

以下試驗方案基于 384 孔板試驗格式（板類型：Matrix 4318 或類似）。反應體積為 30 l，終測定體積為 60 l。對于 96 孔板測定（板類型：Costar 3915 或相似物），反應體積為 60 l，終測定體積為 120 l。

1. 反應：

各反應混合物的總體積為 30 l，包括 26.1 lH2O、3 l10 x 緩沖液、0.3 l100 x 模板、0.3 l100 xRNA 聚合酶和 0.3 l100 xNTP。將反應混合物在 37 ℃ 下孵育 60 min。

2. 檢測：

用水稀釋 10x 熒光染料，制成 1x 染料。將 30 l1 x 染料與 30 l 反應混合物混合。使用 485 nm 激發(fā)波長在 5 min 內(nèi)測量 535 nm 處的熒光強度。

酶抑制試驗方案

該測定法可在測定窗口、測定法線性和對競爭性抑制劑的靈敏度方面進行優(yōu)化。ProFoldin 提供 HTS 分析開發(fā)服務。

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