貨號(hào)：P7600L

品名：EnzScript™ (MMLV Reverse Transcriptase RNase H-)（MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶RNase H-）

產(chǎn)品描述：

EnzScript™（M-MLV Reverse Transcriptase RNase H minus）是一種RNA依賴性DNA聚合酶，不具有可檢測(cè)的RNase H活性。EnzScript™可用于從polyA mRNA或總RNA中產(chǎn)生*鏈cDNA，用于下游應(yīng)用，如RT-PCR，cDNA克隆或RNA-Seq的文庫(kù)構(gòu)建。RNase H結(jié)構(gòu)域中的點(diǎn)突變?cè)黾恿嗣傅臒岱€(wěn)定性，并支持比野生型M-MLV逆轉(zhuǎn)錄酶（1）更高的全長(zhǎng)轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的cDNA產(chǎn)量。

蛋白質(zhì)來(lái)源

攜帶Moloney-Murine白血病病毒逆轉(zhuǎn)錄酶基因的重組大腸桿菌菌株，在RNase H結(jié)構(gòu)域中具有3個(gè)點(diǎn)突變，消除了可檢測(cè)的RNase H活性。

提供：

20 mM Tris-HCl,

100 mM NaCl,

0.1 mM EDTA ,

1 mM DTT,

0.01% NP-40 Alternative,

50% glycerol,

pH 7.5 @ 25°C.

隨附：

5X M-MLV Reverse Transcriptase RNAse H- Reaction Buffer (B7601) and 100mM DTT (B9060)

單位定義 
1單位定義為使用poly r（A）/ oligo（dT）作為底物，在37℃下10分鐘內(nèi)將1 nmol dTTP摻入酸不溶物質(zhì)所需的酶量。

分子量

 75,938Da

試劑盒組成：

聚合酶屬性

分子量：75.9kDa 
*延伸溫度：42℃ 
RNA酶H活性：未檢測(cè)到
單位濃度：200U /μl 
轉(zhuǎn)錄物長(zhǎng)度：12.3 kB

常見應(yīng)用

EnzScript™（M-MLV Reverse Transcriptase RNase H minus）是RNA-依賴性DNA聚合酶，通常用于合成用于RT-PCR擴(kuò)增，cDNA克隆或RNASeq的First-Strand cDNA。與標(biāo)準(zhǔn)M-MLV RT相比，降低的RNA酶H活性使得全長(zhǎng)cDNA轉(zhuǎn)錄物產(chǎn)量更高（> 5kb）并且熱穩(wěn)定性更高。

*鏈反應(yīng)方案

建立*鏈反應(yīng)，如使用不含核酸酶的水，RNase抑制劑，無(wú)RNA酶的試管和帶過(guò)濾器的無(wú)菌移液吸頭時(shí)，應(yīng)采取防止RNA酶降解模板RNA的一般預(yù)防措施。以下程序可用作制備20μlFirst-Strand cDNA反應(yīng)的指導(dǎo)原則。

材料：

•無(wú)菌，無(wú)核酸酶水
•引物（oligo dT （15-20） 或  隨機(jī)六聚體  或 基因特異性）
•dNTP混合物（dATP，dCTP，dGTP，dTTP）
•RNA模板
•RNA酶抑制劑

過(guò)程 ：

1、將以下組分添加到冰上的不含RNase的微量離心管中。對(duì)于多個(gè)反應(yīng)，準(zhǔn)備一個(gè)mastermix。

2. 將微量離心管加熱至65℃5分鐘，并在冰上快速冷卻2分鐘以將引物退火至RNA模板。短暫旋管以收集冷凝物。

3. 將以下組分（每個(gè)*鏈反應(yīng)）添加到冰上的微量離心管中：

4.按照以下步驟孵育每個(gè)20μl*鏈反應(yīng)：

1）25℃2分鐘（oligo dT（15-20），基因特異性引物）或25℃10分鐘（隨機(jī)六聚體）

2) 42℃30-60分鐘

    3）在70°C熱殺15分鐘

5.在下游應(yīng)用中使用cDNA或在-20°C保存。對(duì)于RT-PCR，通常將1至2μl來(lái)自First-Strand反應(yīng)的cDNA作為模板添加到PCR中。可選：在PCR之前去除RNA鏈，向cDNA：RNA雜交體中加入1μlRNA酶H（5U），在37℃孵育20分鐘和65℃孵育10分鐘（熱殺滅）。RNase H治療推薦用于擴(kuò)增長(zhǎng)擴(kuò)增子（> 5 kB）。

部分產(chǎn)品信息：

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