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一、 產(chǎn)品描述
• 英文全名：AAV9 Titration ELISA
• 中文全名：腺相關(guān)病毒9型滴度定量檢測試劑盒
• 國際貨號：PRAAV9
• 品牌歸屬：德國 Progen Biotechnik GmbH
• 產(chǎn)品規(guī)格：96次反應(yīng)/盒（含標(biāo)準(zhǔn)品及配套試劑）
• 核心用途：用于精準(zhǔn)測定腺相關(guān)病毒9型（AAV9）的感染性滴度或物理滴度。
本產(chǎn)品由德國Progen公司進(jìn)口，專為科研及生物制藥領(lǐng)域設(shè)計(jì)，能夠在無需昂貴儀器和復(fù)雜操作的前提下，為AAV9載體提供高效、穩(wěn)定的定量分析解決方案。
二、 產(chǎn)品核心特點(diǎn)
1. 高特異性：采用抗AAV9衣殼蛋白的單克隆抗體，有效避免與其他AAV血清型（如AAV1-AAV8、AAV-DJ等）發(fā)生交叉反應(yīng)，確保檢測背景極低。
2. 操作便捷：預(yù)包被的微孔板與即用型試劑大大縮短了實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備時間，整個流程可在數(shù)小時內(nèi)完成。
3. 寬線性范圍：標(biāo)準(zhǔn)曲線覆蓋至少3個數(shù)量級，能夠準(zhǔn)確定量高濃度或低濃度的病毒樣本。
4. 優(yōu)秀的重現(xiàn)性：板內(nèi)與板間變異系數(shù)（CV%）均嚴(yán)格控制在10%以內(nèi)，保障每一次實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)的可靠性。
5. 高靈敏度：低檢測限可達(dá) 10^7 病毒顆粒（vp）/mL級別，滿足大多數(shù)體內(nèi)外基因遞送實(shí)驗(yàn)的滴度測定需求。
三、 儲存條件與試劑穩(wěn)定性
• 未開封試劑盒儲存：請置于 2-8°C 避光保存，有效期詳見外包裝標(biāo)簽（通常為12個月）。
• 開封后保存建議：
• 捕獲抗體預(yù)包被微孔板：密封放回 2-8°C，避免板條受潮，建議在 4 周內(nèi)使用完畢。
• 酶結(jié)合物（HRP標(biāo)記）：切勿冷凍，短期（1-2周）存放于 2-8°C，長期建議根據(jù)單次用量分裝后置于 -20°C 凍存。
• 檢測緩沖液與洗液：室溫密閉保存，若結(jié)晶析出，使用前預(yù)熱至 37°C 并充分混勻。
• 工作液穩(wěn)定性：配制后的底物液（TMB）需在 30 分鐘內(nèi)避光使用；終止液性質(zhì)穩(wěn)定，但需注意其強(qiáng)酸性。
四、 工作原理（雙抗體夾心ELISA法）
本試劑盒基于經(jīng)典的雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附測定（Sandwich ELISA）原理，專門用于特異性識別并結(jié)合完整的AAV9病毒顆粒。
1. 固相捕獲：微孔板中預(yù)包被了高親和力的抗AAV9特異性單克隆抗體。當(dāng)加入待測樣本或標(biāo)準(zhǔn)品時，樣本中的AAV9病毒顆粒會被這些抗體特異性捕獲并固定在孔板上。
2. 孵育結(jié)合：在適宜的溫度下孵育一定時間，使抗原-抗體結(jié)合達(dá)到平衡，形成“固相抗體-AAV9抗原"復(fù)合物。
3. 酶標(biāo)二抗結(jié)合：洗去未結(jié)合的物質(zhì)后，加入帶有辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記的檢測抗體。該二抗會特異性地結(jié)合到已被捕獲的AAV9衣殼蛋白的另一位點(diǎn)，形成“固相抗體-AAV9-HRP標(biāo)記二抗"的免疫復(fù)合物。
4. 信號放大與檢測：再次洗滌去除游離的酶標(biāo)二抗后，加入顯色底物（通常為TMB）。HRP催化無色底物氧化生成藍(lán)色物質(zhì)，加入終止液后反應(yīng)液變?yōu)辄S色。
5. 定量分析：使用酶標(biāo)儀在 450 nm 波長處測定各孔的吸光度值（OD值）。吸光度與樣本中AAV9的濃度成正比。通過將樣本的OD值代入標(biāo)準(zhǔn)曲線，即可精確計(jì)算出樣本中AAV9的絕對滴度。
五、 解決的核心實(shí)驗(yàn)痛點(diǎn)
在基因治療與基礎(chǔ)生命科學(xué)研究中，腺相關(guān)病毒（AAV）是常用的基因遞送載體之一。然而，科研人員在使用AAV9進(jìn)行實(shí)驗(yàn)時常常面臨以下難題：
1. 傳統(tǒng)滴度測定方法耗時長：如細(xì)胞轉(zhuǎn)染后通過熒光斑點(diǎn)數(shù)（IU/mL）測定感染性滴度，通常需要 48-72 小時才能出結(jié)果，嚴(yán)重拖慢實(shí)驗(yàn)進(jìn)度。
2. qPCR法受雜質(zhì)干擾大：基于DNA提取的qPCR法不僅操作繁瑣，且極易受到樣本中殘留的質(zhì)粒DNA、游離基因組DNA污染，導(dǎo)致滴度被嚴(yán)重高估。
3. 昂貴設(shè)備依賴性強(qiáng)：如透射電子顯微鏡（TEM）或分析型超速離心機(jī)（AUC）雖然能測衣殼滴度，但設(shè)備普及率低且維護(hù)成本高。
4. 不同血清型交叉反應(yīng)導(dǎo)致數(shù)據(jù)失真：廣譜型檢測試劑在面對特定血清型時靈敏度不足。
本產(chǎn)品的解決方案：
本ELISA試劑盒彌補(bǔ)了上述缺陷。它能在 4-5 小時內(nèi)提供基于衣殼蛋白的準(zhǔn)確定量，不受樣本中外源DNA干擾，無需大型儀器設(shè)備，僅需一臺常規(guī)酶標(biāo)儀即可獲得高度可重復(fù)的滴度數(shù)據(jù)，極大提升了AAV9載體的質(zhì)控效率和下游實(shí)驗(yàn)（如動物體內(nèi)注射、細(xì)胞感染）的劑量可控性。
六、 詳細(xì)使用方法與操作流程
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備：
• 將所有試劑盒組分及待測樣本恢復(fù)至室溫（18-25°C），約需 30 分鐘。
• 準(zhǔn)備足量去離子水或超純水用于配制洗滌液。
• 根據(jù)樣本預(yù)估濃度，準(zhǔn)備合適的稀釋緩沖液（推薦使用含1% BSA的PBS）。
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋：
• 試劑盒提供已知濃度的AAV9標(biāo)準(zhǔn)品。取適量標(biāo)準(zhǔn)品，按倍比稀釋法（如1:2或1:5）連續(xù)稀釋6個點(diǎn)，制備標(biāo)準(zhǔn)曲線。低濃度點(diǎn)作為空白對照。
樣本預(yù)處理與稀釋：
• 對于細(xì)胞上清液，可直接取樣或經(jīng)低速離心去除細(xì)胞碎片后取樣。
• 對于濃縮的病毒液，需先進(jìn)行適度稀釋（如 1:100 或 1:1000），使其預(yù)期濃度落在標(biāo)準(zhǔn)曲線的線性范圍內(nèi)。建議每個樣本做2-3個重復(fù)孔。
操作步驟：
1. 加樣與孵育：向微孔板中加入 100 µL 不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品或稀釋后的待測樣本。封板膜密封，室溫下在搖床上輕柔振蕩孵育 2 小時。
2. 洗滌：棄去孔內(nèi)液體，每孔加入 300 µL 洗滌緩沖液，靜置 30 秒后棄去。重復(fù)此步驟 3-5 次。最后在吸水紙上拍干微孔板。
3. 加酶結(jié)合物：每孔加入 100 µL 稀釋好的HRP標(biāo)記檢測抗體。封板后室溫避光孵育 1 小時。
4. 再次洗滌：重復(fù)步驟2的洗滌過程，去除未結(jié)合的酶標(biāo)抗體。
5. 顯色：每孔加入 100 µL TMB底物溶液，室溫避光靜置 15-20 分鐘。此時可觀察到陽性孔逐漸顯現(xiàn)藍(lán)色。
6. 終止反應(yīng)：每孔加入 50 µL 終止液（通常為1M H?SO?），此時溶液顏色由藍(lán)轉(zhuǎn)為黃色。
7. 讀數(shù)計(jì)算：在 15 分鐘內(nèi)，使用酶標(biāo)儀測定 450 nm 處的吸光度值（OD???）。以標(biāo)準(zhǔn)品濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線（通常采用四參數(shù)邏輯回歸擬合）。將樣本的OD值帶入方程，計(jì)算出樣本的實(shí)際濃度，再乘以稀釋倍數(shù)即為原始樣本中的AAV9滴度。
七、 常見問題分析與解決方案
• 問題1：標(biāo)準(zhǔn)曲線線性不佳，R2值低于0.99
• 原因分析：標(biāo)準(zhǔn)品降解或稀釋操作誤差累積；加樣時產(chǎn)生氣泡；孵育溫度不均勻。
• 解決方案：確保標(biāo)準(zhǔn)品分裝保存，避免反復(fù)凍融；使用高精度移液器并定期校準(zhǔn)；加樣時槍頭貼壁緩慢打出液體，避免氣泡；確保孵育環(huán)境（如室溫）恒定。
• 問題2：背景值過高（空白孔OD值偏高）
• 原因分析：洗滌不夠；底物污染；封閉效果不足。
• 解決方案：增加洗滌次數(shù)至5次，并確保每次洗滌后在吸水紙上充分拍干；檢查洗液是否新鮮配制；若樣本基質(zhì)復(fù)雜，可在加標(biāo)準(zhǔn)品前增加1小時的封閉步驟（如使用5%脫脂奶粉或1% BSA）。
• 問題3：樣本復(fù)孔間變異系數(shù)（CV%）過大
• 原因分析：樣本未充分混勻；加樣體積不準(zhǔn)；微孔板邊緣效應(yīng)。
• 解決方案：加樣前充分渦旋并離心樣本；避免在微孔板最外圍一圈加樣（可用無菌水填充邊緣孔）；確保酶標(biāo)儀濾光片干凈無劃痕。
• 問題4：測得的滴度遠(yuǎn)低于預(yù)期
• 原因分析：樣本發(fā)生聚集；保存不當(dāng)導(dǎo)致病毒失活降解；稀釋倍數(shù)計(jì)算錯誤。
• 解決方案：樣本使用前進(jìn)行短暫超聲處理或加入少量非離子型去垢劑（如Triton X-100至終濃度0.1%）打散聚集體；避免反復(fù)凍融；重新精確測定稀釋因子。
關(guān)鍵詞：腺相關(guān)病毒滴度測定、AAV9 ELISA試劑盒、病毒載體定量檢測、Progen AAV9滴定、AAV9空殼率檢測、快速AAV滴度測定、無血清AAV9滴度、AAV9物理滴度測定、基因治療載體質(zhì)控、AAV9感染性滴度、雙抗體夾心ELISA、高特異性AAV9檢測、AAV9定量試劑盒、低成本AAV滴度、免洗AAV檢測試劑盒、AAV9衣殼蛋白定量、生物制藥AAV滴度、AAV9標(biāo)準(zhǔn)品、AAV9 HRP檢測抗體、高靈敏度病毒滴度。
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（注：本文內(nèi)容基于品牌公開資料及行業(yè)常規(guī)信息整理，具體以品牌信息文檔為準(zhǔn)。）
??Progen熱賣產(chǎn)品
貨號 | 品名 | 規(guī)格 | 品牌 |
PRAAV8 | AAV8 Titration ELISA | 96 tests | Progen |
PRAAV9 | AAV9 Titration ELISA | 96 tests | Progen |
690014S | anti-DNA, AC-30-10, mouse mab | 0.2 mL (100 ug/mL) | Progen |
PRAAV2R | AAV2 Titration ELISA 2.0R | 96T | Progen |
PRHYPE-XS | Hyperphage M13 K07ΔpIII | 2ml | Progen |
61014 | anti-DNA mouse monoclonal, AC-30-10, lyophilized, purified (reactivity to all species) Dot Blots , ICC/IF , IHC | 100ug | Progen |
610160 | anti-AAV8 (intact particle) mouse monoclonal, ADK8, lyophilized, purified (reactivity to AAV8) Dot Blots , ELISA , ICC/IF , IHC , IP , Neutralization Assay | 50ug | Progen |
PRATV | AAV2 Titration ELISA | 96T | Progen |
690162 | anti-AAV9, ADK9, mouse mab, liquid | 1 mL (50 ug/mL) | Progen |
610298 | anti-AAV2, A20, mouse recombinant ab | 50ug | Progen |
61084-250ul | anti-AAV VP1/VP2/VP3 (rabbit polyclonal) | 250ul | Progen |
610178 | anti-AAV9, ADK9-1R, mouse recombinant ab | 50ug | Progen |
PRAAV5 | AAV5 Titration ELISA | 96T | Progen |
61055 | aanti-AAV2 (intact particle) mouse monoclonal, A20, lyophilized, purified | 50ug | Progen |
PRAAV6 | AAV6 Titration ELISA | 96T | Progen |
690058S | anti-AAV VP1/VP2/VP3 mouse monoclonal, B1 sample size | 200ul(50ug/ml) | Progen |
PRHYPE | Hyperphage M13 K07ΔpIII | 5 x 2 mL | Progen |
66V020 | AAV2 empty capsids | 100ul | Progen |
66V080 | AAV8 empty capsids | 100ul | Progen |
65158 | anti-AAV VP1/VP2/VP3, B1, mouse mab | 5mL | Progen |
610160S | anti-AAV8, ADK8, mouse mab, sample 10 μg | 10ug | Progen |
GP-N2 | anti-Nephrin, guinea pig pab | 100uL | Progen |
615162 | anti-AAV9 Biotin, ADK9, mouse mab | 750uL | Progen |
PRAAV9XP | AAV9 Xpress ELISA | 96T | Progen |
PRAAV8XP | AAV8 Xpress ELISA | 96T | Progen |
610137 | anti-AAV5, rabbit pab | 250uL | Progen |
610149 | anti-AAV-5, ADK5b, mouse mab | 50ug | Progen |
690298 | anti-AAV2, mouse recombinant ab, A20R | 1ml(50ug/ml) | Progen |
61069 | anti-AAV Replicase, 303.9, mouse mab | 50ug | Progen |
615160 | anti-AAV8 Biotin, ADK8, mouse mab | 750uL | Progen |
GP29-100uL | anti-Perilipin N-terminus, guinea pig pab | 100uL | Progen |
66V090 | AAV9 empty capsids | 100ul | Progen |
610148 | anti-AAV-5, ADK5a, mouse mab | 50ug | Progen |
610159 | anti-AAV6, ADK6, mouse mab | 50ug | Progen |
PRAAV2XP | AAV2 Xpress ELISA | 96T | Progen |
690162S | anti-AAV9, ADK9, Mouse mAk, liquid, Sample | 200uL(50ug/mL) | Progen |
PRAAV1 | AAV1 Titration ELISA | 96T | Progen |
690094S | anti-Synaptopodin, G1D4, mouse mab | 0.2ml(50ug/ml) | Progen |
690058 | anti-AAV VP1/VP2/VP3, B1, mouse mab, liquid | 1 ml (50 ug/ml) | Progen |
PR3005 | Phagemid pSEX81 | 5ug | Progen |
66V060 | AAV6 empty capsids | 100ul | Progen |
16045 | anti-HDC, rabbit pab | 50uL | Progen |
72008 | AAV8 VP1 + VP2 + VP3, recombinant proteins, set | 10ug | Progen |
PRAAV2-C | AAV2 ELISA Control | 1 vial | Progen |
66V050 | AAV5 empty capsids | 100ul | Progen |
gp40-100ul | anti-Perilipin 2 (N-terminus aa 1-29) guinea pig polyclonal serum | 100ul | Progen |
66V010 | AAV1 empty capsids | 100ul | Progen |
PRAAV9-C | AAV9 ELISA Control | 1 vial | Progen |
BK610149 | anti-AAV-5, ADK5b, mouse mab | 1mg | Progen |
690383 | anti-pan AAV, 1C4M, mouse chimeric ab | 1ml(50ug/ml) | Progen |
BK61055 | anti-AAV-2, A20, mouse mab | 1mg | Progen |
61058 | anti-AAV VP1/VP2/VP3, B1, mouse mab | 50ug | Progen |
61058-488 | anti-AAV VP1/VP2/VP3, B1, mouse mab, AFDyeT | 50 ug (100 ul) | Progen |
61058S | anti-AAV VP1/VP2/VP3, B1, mouse mab, sample | 10ug | Progen |
615298 | anti-AAV2 Biotin, A20R, mouse mab | 750uL | Progen |
690014 | anti-DNA mouse monoclonal, AC-30-10, liquid, purified | 1ml(100ug/ml) | Progen |
GP31 | anti-Perilipin 5 C-terminus, guinea pig pab | 100uL | Progen |
65155 | anti-AAV-2, A20, mouse mab | 5mL | Progen |
GP41 | anti-Adipophilin C-terminus, guinea pig pab | 100uL | Progen |
651162 | anti-AAV9, ADK9, mouse mab | 5mL | Progen |
70011 | anti-Perilipin 2,3,5 sample set | 600 ul | Progen |
692378S | anti-AAV9, human chimeric, ADK9-h1, sample | 200 ul (50 ug/ml) | Progen |
692373-1ml | anti-pan AAV (intact particle) human recombinant, 1C4H | 1 ml (50 ug/ml) | Progen |
90002 | anti-mouse IgG goat polyclonal, HRP conjugate 100 μg | 100ug | Progen |
90002-100ug | anti-mouse IgG goat polyclonal, HRP conjugate | 100ug | Progen |
AAV-SAMP | antibody buffer 20ml buffer formulation: PBS, 0,5 M NaCl, 0,25 M L-Arginine, pH 7.4 | 1pc | Progen |
690298S | anti-AAV2, mouse recombinant ab, A20R, sample | 200ul(50ug/ml) | Progen |
690160 | anti-AAV8 (intact particle) mouse monoclonal, ADK8 | 1 ml (50 ug/ml) | Progen |
690159S | anti-AAV6, mouse monoclonal, ADK6, sample | 200 ul (50 ug/ml) | Progen |
690150 | anti-AAV1 (intact particle) mouse monoclonal, ADK1a | 1 ml (50 ug/ml) | Progen |
690148 | anti-AAV-5, ADK5a, mouse mab | 1ml(50ug/ml) | Progen |
690055S | anti-AAV2, A20, mouse mab | 200ul(50ug/ml) | Progen |
690055 | anti-AAV2, A20, mouse mab | 1ml(50ug/ml) | Progen |
690038 | anti-Keratin K8, Ks8.7, mouse mab | 1mL(50ug/mL) | Progen |
GP-SH3 | anti-Calicin, guinea pig pab | 100uL | Progen |
690028 | anti-Keratin K18, Ks18.04, mouse mab | 1mL(50ug/mL) | Progen |
GP34-100uL | anti-Perilipin 4 C-terminus, guinea pig pab | 100uL | Progen |
66V030 | AAV3 empty capsids | 100ul | Progen |
640825 | AAV2 VP3, recombinant protein | 10ug(100ug/ml) | Progen |
PRAAV10 | AAVrh10 Titration ELISA | 96T | Progen |
61058-647 | anti-AAV VP1/VP2/VP3, B1, mouse mab, AFDyeT | 50ug (100 ul) | Progen |
61056 | anti-AAV VP1, A1, mouse mab | 50ug | Progen |
610298S | anti-AAV2, A20R, mouse recombinant ab, sample | 10ug | Progen |
PR6103 | LNP Protein Delivery Kit | 1 kit | Progen |
PRAAV3-C | AAV3 ELISA Control | 1vial | Progen |
PRAAV3R | AAV3 Titration ELISA 2.0R | 96T | Progen |
610150 | anti-AAV1, ADK1a, mouse mab | 50ug | Progen |
610149S | anti-AAV5, ADK5b, mouse mab, sample | 10ug | Progen |
61094 | anti-Synaptopodin, G1D4, mouse mab | 50ug | Progen |
PR5223 | Dip'n'Check AAV2 and AAV3 | 25Ttripes | Progen |
PR5208 | Dip'n'Check AAV8 | 25Ttripes | Progen |
615148 | anti-AAV5 Biotin, ADK5a, mouse mab | 750uL | Progen |
61555 | anti-AAV-2 Biotin, A20, mouse mab | 750uL | Progen |
640823 | AAV2 VP1, recombinant protein | 10ug(100ug/ml) | Progen |
640824 | AAV2 VP2, recombinant protein | 10ug(100ug/ml) | Progen |
651160 | anti-AAV8, ADK8, mouse mab | 5mL | Progen |
PRAAV6XP | AAV6 Xpress ELISA | 96T | Progen |
PRAAV8-C | AAV8 ELISA Control | 1vial | Progen |
GP62-C | anti-p62 Protein C-terminus, guinea pig pab | 100uL | Progen |
GP53 | anti-Vimentin guinea pig polyclonal, serum (reactivity to bovine , human , mouse) ICC/IF , IHC , WB | 100uL | Progen |
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