一、 產(chǎn)品描述

產(chǎn)品基本信息

•   英文全名：TeSR™-E6 （Chemically Defined, Xeno-Free, Serum-Free Medium）

•   中文全名：TeSR™-E6 （成分明確、無血清、無異種成分的多能干細(xì)胞培養(yǎng)基）

•   核心品牌：StemCell Technologies（干細(xì)胞科技公司，簡稱 SCT）

•   常見貨號(hào)參考：05926

•   常見規(guī)格參考：500mL

•   核心種屬適用性：經(jīng)過嚴(yán)格驗(yàn)證，專為人類來源的多能干細(xì)胞設(shè)計(jì)，包括人類胚胎干細(xì)胞（hESCs）和人類誘導(dǎo)多能干細(xì)胞（hiPSCs）。

•   核心應(yīng)用領(lǐng)域：作為成分明確的細(xì)胞分化基礎(chǔ)培養(yǎng)基，特別適用于需要去除轉(zhuǎn)化生長因子 β（TGF-β）和堿性成纖維細(xì)胞生長因子（bFGF）的定向分化實(shí)驗(yàn)，同時(shí)也是常規(guī)無飼養(yǎng)層細(xì)胞高通量篩選與維持?jǐn)U增的優(yōu)質(zhì)選擇。

產(chǎn)品外觀與理化特性

TeSR™-E6 基礎(chǔ)培養(yǎng)基在出廠時(shí)通常為清澈透明的液體，呈淡紅色或淡橙色（源于添加的 pH 指示劑酚紅，便于肉眼監(jiān)測培養(yǎng)環(huán)境的酸堿度變化）。產(chǎn)品經(jīng)過 0.1 微米（μm）的精密無菌過濾，并灌裝在醫(yī)用級(jí)聚對(duì)苯二甲酸乙二醇酯（PETG）或聚碳酸酯（PC）無菌瓶中。每一批次產(chǎn)品在放行前均經(jīng)過嚴(yán)格的細(xì)胞培養(yǎng)性能測試，確保其能夠支持多能干細(xì)胞在連續(xù)傳代中保持正常的核型穩(wěn)定性、高水平的堿性磷酸酶活性以及經(jīng)典的干細(xì)胞克隆形態(tài)。

二、 產(chǎn)品核心特點(diǎn)

本產(chǎn)品的設(shè)計(jì)理念圍繞“精準(zhǔn)控制"與“安全性"展開，其核心特點(diǎn)可以深度歸納為以下四個(gè)維度：

1.  成分明確（Chemically Defined）

    傳統(tǒng)培養(yǎng)基如同“黑盒"，而 TeSR™-E6 則是一本“打開的書"。本培養(yǎng)基中的所有營養(yǎng)成分、維生素、微量元素、脂質(zhì)前體以及重組蛋白生長因子均是以精確的濃度添加，沒有任何一種成分是模糊不清的提取物。這種高度的透明性意味著研究人員在使用時(shí)擁有絕對(duì)的知情權(quán)，能夠根據(jù)自身的實(shí)驗(yàn)需求精準(zhǔn)推算培養(yǎng)基的滲透壓、pH值緩沖能力以及特定信號(hào)通路的激活強(qiáng)度，極大地提升了實(shí)驗(yàn)的可控性與數(shù)據(jù)的可重復(fù)性。

2.  絕對(duì)無血清（Serum-Free）

    本培養(yǎng)基不含有任何形式的動(dòng)物或人類血清。血清雖然是傳統(tǒng)細(xì)胞培養(yǎng)的促生長利器，但其內(nèi)部蘊(yùn)含的數(shù)千種未知蛋白質(zhì)、激素和脂質(zhì)就如同“盲盒"一樣，不僅會(huì)帶來巨大的批次間差異（Lot-to-Lot Variation），還會(huì)在后續(xù)的轉(zhuǎn)錄組測序（RNA-seq）或表觀遺傳分析（ATAC-seq）中造成嚴(yán)重的背景噪音。采用無血清配方，根絕了這些變量，為單細(xì)胞測序等高靈敏度組學(xué)分析保駕護(hù)航。

3.  無異種成分（Xeno-Free）

    所有組成成分均非來源于動(dòng)物（Non-Animal Derived），特別是其中添加的生長因子均為通過基因工程在大腸桿菌或酵母表達(dá)系統(tǒng)中重組表達(dá)并純化而來。這一特性不僅消除了牛海綿狀腦?。˙SE）、豬細(xì)小病毒（PPV）等動(dòng)物源性病原體污染的風(fēng)險(xiǎn)，更為未來多能干細(xì)胞向臨床治療方向的轉(zhuǎn)化鋪平了道路，滿足了嚴(yán)苛的 GMP（藥品生產(chǎn)質(zhì)量管理規(guī)范）級(jí)應(yīng)用的前置要求。

4.  基于經(jīng)典配方的精準(zhǔn)減法優(yōu)化

    TeSR™-E6 并非憑空創(chuàng)造，而是建立在干細(xì)胞界“金標(biāo)準(zhǔn)"——TeSR™-E8™ 的成熟配方之上。研發(fā)團(tuán)隊(duì)通過精準(zhǔn)剔除 TGF-β 和 bFGF 這兩種具有強(qiáng)效多能性維持作用的細(xì)胞因子，巧妙地打破了細(xì)胞的自我更新平衡。這種設(shè)計(jì)不是為了“維持"，而是為了“引導(dǎo)"，它讓細(xì)胞處于一種“隨時(shí)待命分化"的臨界狀態(tài)，極大地降低了后續(xù)啟動(dòng)分化程序時(shí)的阻力，是構(gòu)建分步式分化方案的理想起點(diǎn)。

三、 儲(chǔ)存條件與試劑準(zhǔn)備

為了保證產(chǎn)品中各種不穩(wěn)定成分（特別是重組蛋白和維生素）的生物活性，正確的儲(chǔ)存與配制操作至關(guān)重要。

1. 基礎(chǔ)培養(yǎng)基的儲(chǔ)存

•   短期儲(chǔ)存（頻繁使用期間）：將未開封或已開封的 TeSR™-E6 基礎(chǔ)培養(yǎng)基瓶直接置于 4℃ 冰箱中避光保存。在此條件下，建議在保質(zhì)期內(nèi)盡快使用完畢，通常不超過 2-3 周。

•   長期儲(chǔ)存（不頻繁使用）：若短期內(nèi)不打算使用該培養(yǎng)基，應(yīng)將其分裝后置于 -20℃ 或 -80℃ 超低溫冰箱中冷凍保存。需要注意的是，反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致某些蛋白質(zhì)變性或沉淀析出，因此強(qiáng)烈建議在分裝時(shí)按照每次實(shí)驗(yàn)所需的用量（如 50 mL 或 100 mL）進(jìn)行分裝，避免整瓶反復(fù)凍融。

•   解凍操作：從超低溫冰箱取出的培養(yǎng)基需在 4℃ 環(huán)境下緩慢解凍過夜，或在室溫下輕輕搖晃加速解凍。嚴(yán)禁使用 37℃ 水浴鍋快速加熱解凍，高溫會(huì)瞬間破壞生長因子的空間構(gòu)象致其失活。

2. 補(bǔ)充劑的添加與儲(chǔ)存

TeSR™-E6 作為一款需要即配即用的精細(xì)培養(yǎng)基，通常會(huì)配備一支濃縮型的補(bǔ)充劑（Supplement）。

•   儲(chǔ)存條件：補(bǔ)充劑通常在制造后以凍干粉（Lyophilized Powder）形式提供，需置于 -20℃ 密封保存；若已復(fù)溶（Reconstituted），則應(yīng)在 4℃ 短期保存（通常不超過 1-2 周），長期不用需分裝凍存于 -80℃。

•   配制流程：在超凈工作臺(tái)內(nèi)，將解凍至室溫的基礎(chǔ)培養(yǎng)基瓶蓋打開，使用無菌移液管或量筒，根據(jù)說明書指定的比例（例如 1:50 或 1:100，具體比例請(qǐng)務(wù)必查閱對(duì)應(yīng)批次的產(chǎn)品手冊(cè)）量取所需體積的補(bǔ)充劑。將補(bǔ)充劑緩緩滴入基礎(chǔ)培養(yǎng)基中，同時(shí)輕柔地晃動(dòng)瓶子使其充分混勻。切勿劇烈振蕩，以免產(chǎn)生大量氣泡導(dǎo)致蛋白質(zhì)表面變性。

•   預(yù)熱使用：配制完成的培養(yǎng)基在使用前，需提前從 4℃ 取出，置于 37℃ 水浴鍋或恒溫箱中預(yù)熱至 37℃。細(xì)胞在接觸溫度適宜的培養(yǎng)基時(shí)狀態(tài)最佳，驟冷或驟熱均會(huì)引起細(xì)胞應(yīng)激甚至凋亡。

四、 工作原理：深層次的作用機(jī)制解析

要真正駕馭一款細(xì)胞培養(yǎng)基，就必須洞悉其在細(xì)胞微觀層面觸發(fā)的一系列分子級(jí)聯(lián)反應(yīng)。多能干細(xì)胞的命運(yùn)抉擇主要由幾條核心的信號(hào)通路交織控制，而 TeSR™-E6 正是通過精準(zhǔn)調(diào)控這些通路來發(fā)揮作用。

1. 多能性維持與分化的“陰陽平衡"

在經(jīng)典的干細(xì)胞維持培養(yǎng)基（如 TeSR™-E8™）中，外源添加的 bFGF 和 TGF-β 扮演著“陽"的角色。bFGF 主要通過激活 MAPK/ERK 和 PI3K/AKT 通路來促進(jìn)細(xì)胞的增殖并抑制神經(jīng)外胚層分化；TGF-β 則通過 SMAD2/3 信號(hào)通路抑制視黃酸（RA）介導(dǎo)的中內(nèi)胚層分化。兩者協(xié)同作用，將細(xì)胞牢牢鎖定在 pluripotent（多能）狀態(tài)。

而 TeSR™-E6 的巧妙之處在于實(shí)施了“精準(zhǔn)減法"——去除了 bFGF 和 TGF-β。這一操作相當(dāng)于撤去了壓制細(xì)胞分化的“剎車"。在沒有這兩種核心多能性細(xì)胞因子的情況下，細(xì)胞內(nèi)部的多能性調(diào)控網(wǎng)絡(luò)（如 Oct4, Sox2, Nanog 等核心轉(zhuǎn)錄因子的正反饋環(huán)路）由于缺乏外部信號(hào)支持而逐漸衰減。細(xì)胞開始自發(fā)地上調(diào)分化相關(guān)的基因表達(dá)，進(jìn)入一個(gè)極其脆弱但又充滿潛力的“預(yù)分化（Primed）"狀態(tài)。

2. 細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）與整合素（Integrin）的協(xié)同作用

干細(xì)胞不僅需要化學(xué)信號(hào)（可溶性因子），還需要物理信號(hào)（基質(zhì)硬度與黏附）。TeSR™-E6 中含有優(yōu)化的脂質(zhì)載體和微量元素，這些成分雖然不直接結(jié)合細(xì)胞，但它們能夠調(diào)節(jié)細(xì)胞膜的流動(dòng)性和表面受體的折疊。當(dāng)細(xì)胞鋪展在 Matrigel 或 Vitronectin（玻連蛋白）等細(xì)胞外基質(zhì)上時(shí)，細(xì)胞膜上的整合素受體將外部的物理錨定轉(zhuǎn)化為內(nèi)部的化學(xué)信號(hào)（如 FAK 磷酸化）。TeSR™-E6 提供的營養(yǎng)底物確保了這一機(jī)械轉(zhuǎn)導(dǎo)過程能夠順利進(jìn)行，從而維持細(xì)胞的基礎(chǔ)存活與代謝活性，為接受后續(xù)的分化誘導(dǎo)信號(hào)做好準(zhǔn)備。

3. 無血清環(huán)境下的代謝重塑

血清中含有大量的脂肪酸和膽固醇，細(xì)胞依賴其進(jìn)行膜合成。在無血清的 TeSR™-E6 中，這些成分被精確計(jì)量的特定脂質(zhì)前體和抗氧化劑所取代。這迫使細(xì)胞的代謝模式從“攫取型"向“合成型"轉(zhuǎn)變，激活了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白（SREBPs）通路，這不僅保證了細(xì)胞膜在快速增殖中的更新需求，還意外地發(fā)現(xiàn)這種特定的代謝壓力能夠進(jìn)一步促使表觀遺傳重編程，增加分化過程中的基因表達(dá)動(dòng)態(tài)范圍。

五、 解決實(shí)驗(yàn)中的哪些核心痛點(diǎn)？

在實(shí)際的干細(xì)胞研究一線，科研人員常常面臨諸多令人頭疼的棘手問題。TeSR™-E6 的出現(xiàn)，正是為了精準(zhǔn)切入并解決這些痛點(diǎn)：

1.  消除分化實(shí)驗(yàn)的“啟動(dòng)延遲"與“背景噪音"

    在傳統(tǒng)方案中，要將干細(xì)胞從維持狀態(tài)切換到分化狀態(tài)，通常需要一天的時(shí)間來清洗舊培養(yǎng)基并讓內(nèi)源性因子耗盡。這個(gè)過程的不可控性強(qiáng)。使用 TeSR™-E6 作為基礎(chǔ)分化培養(yǎng)基，可以直接跳過這個(gè)耗時(shí)的清洗期，因?yàn)槠鋬?nèi)部原本就不含有抑制分化的 TGF-β 和 bFGF，細(xì)胞一接種進(jìn)去便立刻暴露在分化信號(hào)的敏感窗口期，大大縮短了實(shí)驗(yàn)周期，提高了分化效率的均一性。

2.  攻克批次間差異導(dǎo)致的實(shí)驗(yàn)無法重復(fù)

    “上個(gè)月做成功的分化，這個(gè)月又失敗了"，這往往是血清或條件培養(yǎng)基惹的禍。TeSR™-E6 的成分明確特性粉碎了這一問題。無論你在北京的實(shí)驗(yàn)室還是上海的實(shí)驗(yàn)室，無論是今年采購還是明年采購，只要配方比例不變，細(xì)胞的響應(yīng)曲線就一致。這對(duì)于需要長期推進(jìn)的臨床前研究或需要發(fā)表在高影響因子期刊上的數(shù)據(jù)尤為重要。

3.  規(guī)避下游基因編輯或組學(xué)分析的干擾

    許多研究團(tuán)隊(duì)在進(jìn)行 CRISPR 敲除或過表達(dá)后，需要通過熒光激活細(xì)胞分選（FACS）來富集陽性克隆。血清中的多種蛋白質(zhì)會(huì)與抗體發(fā)生非特異性結(jié)合，導(dǎo)致假陽性或背景過高。TeSR™-E6 的無血清、無異種蛋白特性，為流式分析和單細(xì)胞測序提供了一個(gè)極度“干凈"的背景，確保了微弱信號(hào)也能被靈敏捕獲。

六、 詳細(xì)使用方法與標(biāo)準(zhǔn)操作流程 (SOP)

為了充分發(fā)揮 TeSR™-E6 的性能，建議嚴(yán)格按照以下步驟進(jìn)行操作。本流程以 6 孔板（約 10 cm2 生長面積）培養(yǎng) hPSCs 為例。

第一部分：每日維護(hù)與換液操作

1.  預(yù)熱培養(yǎng)基：從 4℃ 冰箱取出配制好的 TeSR™-E6 培養(yǎng)基，置于 37℃ 水浴鍋中預(yù)熱 15-30 分鐘。同時(shí)，將含有細(xì)胞的培養(yǎng)板從培養(yǎng)箱中取出，放在超凈工作臺(tái)的支架上。

2.  觀察細(xì)胞狀態(tài)：在顯微鏡下快速掃視細(xì)胞。健康的 hPSCs 應(yīng)該呈現(xiàn)高核質(zhì)比、明顯的克隆邊緣以及光滑的單層鋪展。如果發(fā)現(xiàn)克隆邊緣有扁平狀的 differentiating cells（分化細(xì)胞，通常形態(tài)類似上皮細(xì)胞或成纖維細(xì)胞），應(yīng)記錄其位置，以便后續(xù)傳代時(shí)避開。

3.  更換新鮮培養(yǎng)基：使用無菌移液器，小心吸去孔板內(nèi)的舊培養(yǎng)基。操作時(shí)應(yīng)將槍頭貼壁緩慢吸取，避免槍頭直接接觸并吹打到底部的細(xì)胞層，防止物理損傷。每孔加入 2 mL 新鮮的預(yù)熱 TeSR™-E6 培養(yǎng)基。

4.  放回培養(yǎng)箱：將培養(yǎng)板輕輕搖勻，使培養(yǎng)基覆蓋均勻，放回 37℃、5% CO? 及飽和濕度的細(xì)胞培養(yǎng)箱中。

第二部分：細(xì)胞傳代操作（以 EDTA 溫和消化為例）

當(dāng)細(xì)胞融合度達(dá)到 70%-80%（通常在接種后 3-4 天），且克隆中心開始出現(xiàn)重疊或輕微分化時(shí)，需要進(jìn)行傳代。

1.  制備包被板：提前一天或至少提前 1 小時(shí)，在新的培養(yǎng)板中加入稀釋好的細(xì)胞外基質(zhì)包被液（如 Matrigel 或 Geltrex），確保底部均勻覆蓋，置于 37℃ 孵育。使用前吸除包被液，用無菌 PBS 輕輕潤洗一次。

2.  消化細(xì)胞：吸除舊培養(yǎng)基，用 DPBS（不含鈣鎂離子）輕輕洗滌細(xì)胞一次。加入預(yù)熱的 0.5 mM EDTA 消化液，淹沒孔底即可。將培養(yǎng)板放回 37℃ 培養(yǎng)箱孵育 3-5 分鐘。

3.  終止消化：在顯微鏡下觀察到克隆邊緣變得松散、細(xì)胞間隙增大時(shí)，立即取出培養(yǎng)板。加入 2 倍體積的 TeSR™-E6 培養(yǎng)基（含 Rock 抑制劑 Y-27632，濃度 10 μM，以提高單細(xì)胞存活率）輕柔吹打終止消化。

4.  細(xì)胞重懸與接種：用無菌吸管或移液器將細(xì)胞輕輕吹打重懸（避免過度吹打產(chǎn)生氣泡），按 1:6 到 1:10 的比例將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至預(yù)先準(zhǔn)備好的新包被培養(yǎng)板中。補(bǔ)充適量新鮮的 TeSR™-E6 培養(yǎng)基，輕輕十字搖勻，放回培養(yǎng)箱。

第三部分：細(xì)胞凍存與復(fù)蘇

•   凍存：將處于對(duì)數(shù)生長期的細(xì)胞用 Accutase 或 TrypLE 解離成單細(xì)胞，離心收集。用預(yù)先冰浴的凍存液（如 CryoStor CS10 或無血清凍存液）重懸細(xì)胞至 1-5 × 10? cells/mL。分裝至凍存管，置于程序降溫盒中，-80℃ 過夜后轉(zhuǎn)入液氮長期保存。

•   復(fù)蘇：從液氮中取出凍存管，迅速放入 37℃ 水浴鍋搖晃至剛剛?cè)诨s 90 秒）。在超凈臺(tái)內(nèi)將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至含有 5 mL TeSR™-E6 培養(yǎng)基（含 Rock 抑制劑）的離心管中，300 g 離心 5 分鐘。棄上清，用 1 mL 新鮮培養(yǎng)基重懸，接種至預(yù)先包被好的 24 孔板中央，補(bǔ)加培養(yǎng)基至總體積 2 mL。

七、 常見問題與深度解決方案 (Troubleshooting)

問題一：細(xì)胞復(fù)蘇后存活率極低，大面積漂浮死亡

•   深度歸因：無血清培養(yǎng)基對(duì)單細(xì)胞應(yīng)激極為敏感。如果在凍存前細(xì)胞未達(dá)到最佳活力，或者凍存液不適合無血清環(huán)境，細(xì)胞極易發(fā)生凋亡。此外，復(fù)蘇時(shí)未使用 Rock 抑制劑也是主因之一。

•   解決方案：確保凍存前細(xì)胞狀態(tài)良好且無分化跡象。復(fù)蘇后的前 48 小時(shí)內(nèi)，務(wù)必在 TeSR™-E6 中添加 10 μM 的 Y-27632（Rock 抑制劑）以支持細(xì)胞貼壁和鋪展。檢查凍存液滲透壓，建議使用專為無血清細(xì)胞設(shè)計(jì)的低 DMSO 凍存液。

問題二：細(xì)胞傳代后生長極其緩慢，遲遲不形成克隆

•   深度歸因：這通常是由于傳代比例過低（接種太稀）或細(xì)胞外基質(zhì)（ECM）包被失效導(dǎo)致的。TeSR™-E6 缺乏血清中的粘附促進(jìn)因子，對(duì)底物包被的要求高。

•   解決方案：提高接種密度，初次傳代建議使用 1:3 到 1:5 的比例。重新配制 Matrigel 或 Vitronectin 包被液，確保膠原蛋白濃度達(dá)標(biāo)，且包被時(shí)間足夠（至少 1 小時(shí)，最好 4℃ 過夜）。

問題三：培養(yǎng)基顏色變黃過快（pH 驟降）

•   深度歸因：細(xì)胞密度過高，代謝過于旺盛，產(chǎn)生了大量乳酸；或者培養(yǎng)箱 CO? 濃度失控（偏高）；也可能是由于污染（細(xì)菌快速產(chǎn)酸）。

•   解決方案：增加每日換液頻率至每天兩次（早/晚各一次），或擴(kuò)大傳代比例。檢查培養(yǎng)箱 CO? 探頭是否需要校準(zhǔn)。如果懷疑污染，立即丟棄細(xì)胞并消毒超凈臺(tái)。

問題四：干細(xì)胞克隆形態(tài)異常（如扁平、邊界不清、出現(xiàn)囊狀結(jié)構(gòu)）

•   深度歸因：這是典型的早期分化跡象。雖然 TeSR™-E6 去除了 bFGF 和 TGF-β，但如果培養(yǎng)環(huán)境中有意外的分化誘導(dǎo)因子（如內(nèi)毒素污染的試劑），或者細(xì)胞本身多能性基因表達(dá)已下調(diào)，就會(huì)發(fā)生自發(fā)分化。

•   解決方案：使用未分化標(biāo)志物（如 Tra-1-60 或 SSEA-4）進(jìn)行免疫熒光染色確認(rèn)。若是輕微分化，可手動(dòng)刮除分化區(qū)域；若大面積分化，建議終止該批次細(xì)胞，重新復(fù)蘇早期凍存的健康細(xì)胞。

問題五：細(xì)胞在傳代消化時(shí)極易脫落成片，難以解離成單細(xì)胞

•   深度歸因：細(xì)胞融合度超標(biāo)（超過 90%），克隆之間互相擠壓堆疊，導(dǎo)致細(xì)胞與基質(zhì)之間的黏附力（通過整合素介導(dǎo)）過強(qiáng)。此外，EDTA 濃度不足或作用時(shí)間不夠也會(huì)導(dǎo)致鈣依賴性黏附分子（如 E-cadherin）無法有效解離。

•   解決方案：嚴(yán)格控制傳代時(shí)機(jī)，在 70%-80% 融合度時(shí)及時(shí)傳代?？蛇m當(dāng)提高 EDTA 濃度至 0.5 mM 或延長室溫下消化時(shí)間至 5-7 分鐘，并輔以輕柔的機(jī)械吹打輔助解離。

問題六：流式細(xì)胞術(shù)檢測時(shí)發(fā)現(xiàn)背景熒光較高

•   深度歸因：盡管 TeSR™-E6 是無血清配方，但其中含有的重組蛋白或細(xì)胞在凋亡/壞死時(shí)釋放的碎片可能會(huì)與熒光標(biāo)記的抗體發(fā)生Fc段非特異性結(jié)合。

•   解決方案：在染色前使用 Fc 受體阻斷劑（Fc Receptor Blocking Solution）處理細(xì)胞。增加洗滌步驟（DPBS + 2% BSA 洗滌 2-3 次），并確?？贵w稀釋液中含有適量的疊氮鈉（NaN?）和 BSA 以降低非特異性結(jié)合。

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