第一部分：產(chǎn)品描述

品牌（Brand）： Promega

英文名（English Name）： ONE-Glo™ Luciferase Assay System

中文名（Chinese Name）： ONE-Glo™ 螢光素酶檢測(cè)系統(tǒng)（亦常被稱(chēng)為ONE-Glo™ 螢光素酶報(bào)告基因均相檢測(cè)試劑盒）

貨號(hào)（Catalog Number）： E6120

規(guī)格（Size）： 100ml（系統(tǒng)總?cè)萘浚?，包?100ml ONE-Glo™ Luciferase Assay Buffer 以及 1瓶（vial）凍干態(tài)（lyophilized）的 ONE-Glo™ Luciferase Assay Substrate。

預(yù)期用途： 本品僅供科學(xué)研究使用，不得用于人體診斷、治療或其他臨床程序。本系統(tǒng)專(zhuān)為哺乳動(dòng)物細(xì)胞中螢火蟲(chóng)（Firefly）螢光素酶報(bào)告基因的表達(dá)定量而設(shè)計(jì)，采用均質(zhì)（Homogeneous）的一步法檢測(cè)原理。

第二部分：產(chǎn)品概述與背景

在分子生物學(xué)、藥理學(xué)和生物醫(yī)學(xué)研究中，科學(xué)家經(jīng)常需要追蹤特定基因在細(xì)胞內(nèi)的表達(dá)情況。為了實(shí)現(xiàn)這一目標(biāo)，研究人員開(kāi)發(fā)出了“報(bào)告基因（Reporter Gene）"技術(shù)。其中，螢火蟲(chóng)螢光素酶（Firefly Luciferase，簡(jiǎn)稱(chēng) Fluc）因其催化反應(yīng)能夠產(chǎn)生強(qiáng)的生物發(fā)光信號(hào)，且背景噪音極低，成為了極受歡迎的報(bào)告基因工具。

然而，隨著現(xiàn)代藥物篩選和基因組學(xué)研究的飛速發(fā)展，科研工作者對(duì)實(shí)驗(yàn)通量提出了高的要求。傳統(tǒng)的螢光素酶檢測(cè)試劑往往存在諸多局限：例如試劑配制后極不穩(wěn)定、發(fā)光信號(hào)衰減過(guò)快導(dǎo)致無(wú)法完成大規(guī)模連續(xù)讀數(shù)、對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)基中的成分（如酚紅、血清、抗氧化劑等）高度敏感導(dǎo)致假陰性，以及在手工或機(jī)械臂加樣過(guò)程中極易產(chǎn)生泡沫干擾信號(hào)等。

正是為了攻克上述技術(shù)瓶頸，Promega 公司依托其深厚的酶工程與生物化學(xué)底蘊(yùn)，研發(fā)推出了 ONE-Glo™ Luciferase Assay System。該系統(tǒng)采用了一種全新的螢光素酶底物化學(xué)配方。它不僅大幅提升了試劑在溶解后的物理和化學(xué)穩(wěn)定性，還顯著降低了傳統(tǒng)試劑有的刺鼻氣味，并且對(duì)常見(jiàn)的實(shí)驗(yàn)干擾因素展現(xiàn)出了優(yōu)異的耐受性。貨號(hào) E6120 作為其 100ml 的中等規(guī)模包裝，極其適合中小型實(shí)驗(yàn)室開(kāi)展 384 孔板乃至 1536 孔板的高通量篩選工作。

第三部分：工作原理詳解

要深刻理解 ONE-Glo™ 系統(tǒng)的強(qiáng)大之處，我們需要從其底層的生物化學(xué)反應(yīng)機(jī)制說(shuō)起。螢火蟲(chóng)螢光素酶（Luciferase）是一種分子量約為 60 kDa 的單體蛋白，它能夠催化底物發(fā)生氧化反應(yīng)，并將化學(xué)能轉(zhuǎn)化為光能。

1. 經(jīng)典的兩步發(fā)光機(jī)制

在經(jīng)典的螢火蟲(chóng)螢光素酶反應(yīng)中，通常需要以下幾種核心底物：D-熒光素（D-Luciferin）、三磷酸腺苷（ATP）、鎂離子（Mg2?）以及氧氣。反應(yīng)過(guò)程主要分為兩步：

• 第一步（腺苷化反應(yīng)）： 螢光素酶首先催化 D-熒光素與 ATP 結(jié)合，生成熒光素-腺苷酸中間體（Luciferyl-adenylate），同時(shí)釋放出一分子的焦磷酸（PPi）。

• 第二步（氧化發(fā)光反應(yīng)）： 在氧氣的存在下，該中間體被氧化生成處于激發(fā)態(tài)的氧化熒光素（Oxyluciferin），當(dāng)激發(fā)態(tài)的氧化熒光素回到基態(tài)時(shí)，便會(huì)釋放出一個(gè)光子，產(chǎn)生我們?nèi)庋劭梢?jiàn)的生物發(fā)光現(xiàn)象。

2. ONE-Glo™ 系統(tǒng)的化學(xué)改良

傳統(tǒng)的商用檢測(cè)試劑大多直接使用 D-熒光素作為底物。D-熒光素在水溶液中容易發(fā)生自發(fā)的非酶促氧化，這導(dǎo)致試劑在溶解后極不穩(wěn)定，需要現(xiàn)配現(xiàn)用，且伴隨著強(qiáng)烈的硫醇類(lèi)刺激性氣味。

ONE-Glo™ 系統(tǒng)則采用了一種 Promega 保護(hù)的新型螢光素酶底物。這種底物經(jīng)過(guò)特殊的化學(xué)修飾，具有以下理化特性：

• 更強(qiáng)的抗自氧化能力： 即使在室溫或含氧環(huán)境中，該底物的自發(fā)降解速率也遠(yuǎn)低于 D-熒光素，從而賦予了試劑長(zhǎng)期穩(wěn)定性。

• 更低的揮發(fā)性有機(jī)物（VOCs）釋放： 極大地消除了傳統(tǒng)試劑令人不適的氣味，改善了實(shí)驗(yàn)室人員的操作環(huán)境。

• 優(yōu)化的酶動(dòng)力學(xué)曲線(xiàn)： 該底物與螢光素酶的結(jié)合效率更高，產(chǎn)生的光子流更強(qiáng)，且“輝光（Glow-type）"持續(xù)時(shí)間更長(zhǎng)（可達(dá) 40 分鐘以上），為高通量?jī)x器的連續(xù)讀數(shù)留足了時(shí)間窗口。

當(dāng) ONE-Glo™ 試劑加入到含有螢光素酶報(bào)告基因的細(xì)胞樣品中時(shí)，試劑中的去污劑成分會(huì)瞬間溫和地裂解細(xì)胞膜，將細(xì)胞內(nèi)的螢光素酶釋放到溶液中。隨后，新型底物在酶的催化下迅速發(fā)生氧化反應(yīng)，產(chǎn)生與細(xì)胞內(nèi)螢光素酶表達(dá)量呈嚴(yán)格正相關(guān)的發(fā)光信號(hào)?？蒲腥藛T只需使用微孔板讀板機(jī)檢測(cè)發(fā)光強(qiáng)度（Relative Light Units, RLU），即可精準(zhǔn)計(jì)算出目標(biāo)基因的相對(duì)表達(dá)水平。

第四部分：產(chǎn)品核心特點(diǎn)深度解讀

1. 靈活便捷的儲(chǔ)存條件，打破冷鏈?zhǔn)`

對(duì)于常規(guī)的生物酶類(lèi)試劑，嚴(yán)格的低溫冷凍往往是維持活性的手段。然而，ONE-Glo™ 系統(tǒng)在配方設(shè)計(jì)上實(shí)現(xiàn)了突破。數(shù)據(jù)顯示，其溶解后的 ONE-Glo™ 試劑在室溫（約 22°C）下可以穩(wěn)定存放長(zhǎng)達(dá) 3 周，而在 2°C 至 10°C 的普通冰箱冷藏環(huán)境下更是可以穩(wěn)定保存 3 個(gè)月，期間試劑的功能性?xún)H有約 12% 的自然衰減。這意味著研究人員不再需要頻繁地將試劑在冰盒與冰箱之間來(lái)回轉(zhuǎn)移，極大地簡(jiǎn)化了日常實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)備流程，同時(shí)也為自動(dòng)化工作站的全天候連續(xù)運(yùn)行掃清了障礙。

2. 尊享清新操作環(huán)境，告別刺鼻異味

做過(guò)傳統(tǒng)螢光素酶實(shí)驗(yàn)的科研人員一定深有體會(huì)，普通 D-熒光素試劑在溶解和反應(yīng)過(guò)程中會(huì)釋放出一股濃烈的、類(lèi)似于臭雞蛋或腐爛蔬菜的揮發(fā)性硫化物氣味。這不僅嚴(yán)重影響了實(shí)驗(yàn)室的空氣質(zhì)量，長(zhǎng)期吸入還可能對(duì)實(shí)驗(yàn)人員的呼吸道造成刺激。ONE-Glo™ 的新型底物從根本上解決了這一痛點(diǎn)，其在整個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程中幾乎不產(chǎn)生任何難聞氣味，為您和團(tuán)隊(duì)提供了一個(gè)更加舒適、健康的科研環(huán)境。

3. 抗擾能力，無(wú)視混合與分裝誤差

在 384 孔板或 1536 孔板的高通量實(shí)驗(yàn)中，機(jī)械臂的分液精度和加樣后的混勻力度很難做到孔與孔之間全一致。某些敏感的發(fā)光試劑在遭遇劇烈震蕩或形成微小氣泡時(shí)，發(fā)光信號(hào)會(huì)出現(xiàn)劇烈波動(dòng)，導(dǎo)致數(shù)據(jù)的重現(xiàn)性極差（High CV%）。ONE-Glo™ 試劑展現(xiàn)出了佳的物理耐受性，它對(duì)混合和分裝條件的變化極不敏感。無(wú)論是在手工操作中稍微搖晃了幾下，還是自動(dòng)化設(shè)備留下了微小的氣泡，其最終的讀數(shù)都能保持高度的一致性和穩(wěn)定性，從而大幅提升了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠程度。

4. 專(zhuān)為高密度微孔板量身定制

隨著藥物篩選通量的提升，越來(lái)越多的實(shí)驗(yàn)室開(kāi)始普及 384 孔板和 1536 孔板。在這些高密度孔板中，每孔的加樣體積往往被壓縮在幾微升到幾十微升之間，極小的液體體積使得蒸發(fā)效應(yīng)和熱散失變得尤為顯著。ONE-Glo™ 試劑憑借其獨(dú)特的緩沖體系和底物配方，即使在如此小體積、高密度環(huán)境下，依然能夠提供明亮且持久的發(fā)光信號(hào)，是開(kāi)展 siRNA 文庫(kù)篩選、CRISPR 全基因組敲除篩選的理想搭檔。

5. 更強(qiáng)的基質(zhì)效應(yīng)耐受力，弱化假陰性風(fēng)險(xiǎn)

哺乳動(dòng)物細(xì)胞的生長(zhǎng)離不開(kāi)復(fù)雜的培養(yǎng)基，而培養(yǎng)基中往往含有酚紅（pH 指示劑）、血清蛋白、各種氨基酸以及抗氧化劑（如維生素C、谷胱甘肽等）。這些物質(zhì)中，酚紅和維生素C恰恰是螢光素酶催化反應(yīng)的天敵，它們會(huì)通過(guò)淬滅自由基或直接消耗底物的方式來(lái)抑制發(fā)光信號(hào)。ONE-Glo™ 系統(tǒng)經(jīng)過(guò)特殊優(yōu)化，對(duì)這些常見(jiàn)的細(xì)胞培養(yǎng)基成分具有高的耐受閾值。研究人員甚至可以在不全移除培養(yǎng)基的情況下直接進(jìn)行檢測(cè)，這不僅節(jié)省了洗板的時(shí)間，更避免了因清洗不全或細(xì)胞脫落所帶來(lái)的數(shù)據(jù)偏差。

第五部分：儲(chǔ)存與運(yùn)輸條件

為了保證 ONE-Glo™ Luciferase Assay System (E6120) 的最佳性能，請(qǐng)務(wù)必嚴(yán)格遵守以下儲(chǔ)存與運(yùn)輸規(guī)范：

1. 未開(kāi)封的原始試劑儲(chǔ)存

• ONE-Glo™ Luciferase Assay Buffer (100ml, 子貨號(hào) E605B)： 收到產(chǎn)品后，應(yīng)將其存放于 -30°C 至 -10°C 的低溫冰箱中。若短期內(nèi)（3個(gè)月內(nèi)）頻繁使用，也可將其置于 2°C 至 10°C 的普通冷藏室，其功能性變化極小（約 10%）。

• ONE-Glo™ Luciferase Assay Substrate (1 vial, 子貨號(hào) E606B)： 凍干粉狀態(tài)極不穩(wěn)定，必須在 -30°C 至 -10°C 的環(huán)境下避光保存。

2. 運(yùn)輸條件

本產(chǎn)品在運(yùn)輸過(guò)程中會(huì)使用干冰或足量冰袋進(jìn)行包裝，以確保其始終處于規(guī)定的低溫區(qū)間內(nèi)。

3. 試劑復(fù)溶后的儲(chǔ)存（重要提示）

當(dāng)您將 Buffer 加入到 Substrate 凍干粉中，配制成 ONE-Glo™ Reagent（工作液）后，其儲(chǔ)存條件變得非常寬容：

• 室溫（約 22°C）： 可穩(wěn)定保存 3 周。

• 冷藏（2°C 至 10°C）： 可穩(wěn)定保存 3 個(gè)月。

• 冷凍（-20°C）： 不建議反復(fù)凍融。一旦復(fù)溶，建議在有效期內(nèi)一次性用完或分裝保存。

第六部分：實(shí)驗(yàn)所需材料與試劑配制

1. 實(shí)驗(yàn)所需自備材料

• 表達(dá)螢火蟲(chóng)螢光素酶的哺乳動(dòng)物細(xì)胞（貼壁或懸浮均可）。

• 標(biāo)準(zhǔn)細(xì)胞培養(yǎng)體系（含血清的培養(yǎng)基，不含干擾性過(guò)高的抗氧化補(bǔ)充劑）。

• 可調(diào)量程移液器及無(wú)菌吸頭（如進(jìn)行高通量實(shí)驗(yàn)，需配備多通道移液器或自動(dòng)分液器）。

• 適用于發(fā)光檢測(cè)的白色不透明微孔板（推薦使用 Corning、Greiner 等品牌的白色底板，以減少孔間信號(hào)串?dāng)_）。

• 微孔板發(fā)光檢測(cè)儀（Luminometer），具備單次讀取或動(dòng)力學(xué)讀取模式。

2. ONE-Glo™ 工作液的配制步驟

• 取出一瓶全解凍（或平衡至室溫）的 ONE-Glo™ Luciferase Assay Buffer (100ml)。

• 將 Buffer 全部倒入裝有 ONE-Glo™ Luciferase Assay Substrate (凍干粉) 的玻璃瓶中。

• 蓋緊瓶蓋，用手輕輕上下顛倒混勻，直至瓶底的白色凍干粉全溶解，溶液變?yōu)槌吻逋该鳡睿ù诉^(guò)程通常需要 1 至 2 分鐘）。

• 注意：請(qǐng)勿使用渦旋振蕩器（Vortex）劇烈震蕩，以免產(chǎn)生大量難以消除的泡沫，影響后續(xù)加樣精度。

第七部分：標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)操作流程 (SOP)

第一步：細(xì)胞培養(yǎng)與模型構(gòu)建

根據(jù)您的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，將穩(wěn)定轉(zhuǎn)染或瞬時(shí)轉(zhuǎn)染了螢火蟲(chóng)螢光素酶報(bào)告基因的細(xì)胞接種于合適的微孔板中。以 96 孔板為例，每孔接種 1×10? 至 2×10? 個(gè)細(xì)胞；以 384 孔板為例，每孔接種 5×103 個(gè)左右。將細(xì)胞置于 37°C、5% CO? 的培養(yǎng)箱中過(guò)夜培養(yǎng)，待細(xì)胞貼壁并達(dá)到約 70% - 80% 的融合度時(shí)，進(jìn)行后續(xù)的藥物或基因處理。

第二步：施加實(shí)驗(yàn)干預(yù)

根據(jù)您的課題需求，向細(xì)胞中加入待測(cè)化合物（如藥物小分子、siRNA、質(zhì)粒等）或相應(yīng)的對(duì)照溶劑。繼續(xù)培養(yǎng)所需的時(shí)間（通常為 6 小時(shí)至 48 小時(shí)不等，視具體信號(hào)響應(yīng)動(dòng)力學(xué)而定）。

第三步：去除培養(yǎng)基（可選）

如果您使用的是普通的非酚紅培養(yǎng)基，且細(xì)胞狀態(tài)良好，您可以直接跳過(guò)洗板步驟，帶著培養(yǎng)基進(jìn)行第四步。但如果您的培養(yǎng)基中含有高濃度的干擾物質(zhì)，或者您追求低背景，可以使用移液器小心吸走舊培養(yǎng)基，并根據(jù)需要加入 20µl 至 50µl 的新鮮普通培養(yǎng)基或 PBS。

第四步：加入 ONE-Glo™ 檢測(cè)試劑

將配制好的 ONE-Glo™ Reagent 平衡至室溫。按照與孔內(nèi)原有液體體積 1:1 的比例加入檢測(cè)試劑。例如，如果孔內(nèi)留有 100µl 的培養(yǎng)基，則加入 100µl 的 ONE-Glo™ Reagent。如果是無(wú)培養(yǎng)基的干孔，則直接加入 100µl 試劑。

• 小型實(shí)驗(yàn)： 使用多通道移液器快速加入。

• 高通量實(shí)驗(yàn)： 使用自動(dòng)分液器（如 Multidrop™）設(shè)定好流速和體積進(jìn)行分裝。

第五步：輕晃混勻與孵育

加樣完畢后，使用微孔板振蕩器（Orbital Shaker）以中等轉(zhuǎn)速（約 300-500 rpm）輕晃微孔板 2 至 5 分鐘，確保裂解液與細(xì)胞充分接觸并使酶促反應(yīng)達(dá)到平衡。或者，如果您使用的是可自動(dòng)振蕩的讀板機(jī)，也可以在進(jìn)艙前手動(dòng)混勻。

第六步：檢測(cè)發(fā)光信號(hào)

將微孔板放入微孔板發(fā)光檢測(cè)儀中。設(shè)置儀器參數(shù)：通常不需要設(shè)置激發(fā)光濾光片（因?yàn)槲灩馑孛甘巧锇l(fā)光，不需要激發(fā)），發(fā)射光檢測(cè)范圍設(shè)為全波長(zhǎng)或 550nm - 600nm。建議積分時(shí)間設(shè)置為 0.5 秒至 1 秒每孔。記錄下各個(gè)孔位的相對(duì)發(fā)光單位（RLU）數(shù)值。

第八部分：本產(chǎn)品解決的實(shí)驗(yàn)痛點(diǎn)剖析

在過(guò)往的科研實(shí)踐中，許多實(shí)驗(yàn)室在使用傳統(tǒng)螢光素酶檢測(cè)系統(tǒng)時(shí)，常常陷入以下困境，而 ONE-Glo™ 正是為解決這些問(wèn)題而生：

• 痛點(diǎn)一：試劑“見(jiàn)光死"，半衰期太短

 傳統(tǒng)試劑溶解后必須在幾個(gè)小時(shí)內(nèi)測(cè)完，否則信號(hào)驟降。ONE-Glo™ 打破了這一問(wèn)題，其長(zhǎng)達(dá)數(shù)周的室溫穩(wěn)定性，讓您可以上午配液，下午甚至第二天再?gòu)娜葑x數(shù)。

• 痛點(diǎn)二：氣泡殺手，數(shù)據(jù)忽高忽低

 在快速加樣時(shí)，液體撞擊液面極易產(chǎn)生氣泡。傳統(tǒng)試劑遇到氣泡，光信號(hào)會(huì)被折射或遮擋，導(dǎo)致同一次實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)變異系數(shù)（CV%）居高不下。ONE-Glo™ 對(duì)物理擾動(dòng)具有免疫力，即使帶有微量氣泡，讀數(shù)依然堅(jiān)挺。

• 痛點(diǎn)三：怕水又怕臟，基質(zhì)干擾大

 很多實(shí)驗(yàn)需要在含有高濃度血清或特定添加劑的培養(yǎng)基中進(jìn)行。傳統(tǒng)試劑一旦遇到酚紅或抗氧化劑，發(fā)光信號(hào)會(huì)被抑制 50% 甚至更多。ONE-Glo™ 擁有高的“抗污"能力，在復(fù)雜的培養(yǎng)體系中依然能保持信號(hào)的線(xiàn)性響應(yīng)。

• 痛點(diǎn)四：氣味熏天，通風(fēng)櫥里都扛不住

 實(shí)驗(yàn)室的通風(fēng)系統(tǒng)有時(shí)候也扛不住劣質(zhì)試劑的惡臭。ONE-Glo™ 的環(huán)保無(wú)味配方，讓您可以安心在超凈臺(tái)或普通實(shí)驗(yàn)臺(tái)上操作，不必時(shí)刻屏住呼吸。

• 痛點(diǎn)五：小體積檢測(cè)信號(hào)弱，蒸發(fā)惹的禍

 在 1536 孔板中，幾微升的試劑眨眼間就會(huì)蒸發(fā)變干。ONE-Glo™ 的緩沖體系能有效減緩蒸發(fā)帶來(lái)的影響，保證小體積下的信號(hào)強(qiáng)度。

第九部分：常見(jiàn)問(wèn)題與解決方案 (Troubleshooting)

問(wèn)題一：發(fā)光信號(hào)整體偏弱，甚至接近空白背景

• 可能原因： 細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率過(guò)低；螢光素酶表達(dá)量本身極低；檢測(cè)試劑配制錯(cuò)誤（如 Buffer 未全溶解底物）；或者細(xì)胞數(shù)量過(guò)少。

• 解決方案： 優(yōu)化轉(zhuǎn)染條件（如更換轉(zhuǎn)染試劑、調(diào)整 DNA 與轉(zhuǎn)染試劑比例）；增加細(xì)胞接種密度；仔細(xì)檢查試劑配制步驟，確保凍干粉全化開(kāi)；延長(zhǎng)加樣后的孵育時(shí)間至 10 分鐘后再讀數(shù)。

問(wèn)題二：實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組之間沒(méi)有顯著差異（無(wú)響應(yīng)）

• 可能原因： 藥物或刺激因子劑量不足；作用時(shí)間不夠；報(bào)告基因載體構(gòu)建有誤（如啟動(dòng)子序列缺失）；或者細(xì)胞系對(duì)該通路不敏感。

• 解決方案： 進(jìn)行藥物的梯度稀釋測(cè)試，尋找最佳起效濃度；延長(zhǎng)藥物處理時(shí)間；重新測(cè)序驗(yàn)證載體的準(zhǔn)確性；嘗試使用陽(yáng)性對(duì)照質(zhì)粒（如 pGL3-Control）來(lái)確認(rèn)系統(tǒng)是否正常運(yùn)作。

問(wèn)題三：數(shù)據(jù)重現(xiàn)性差，孔間差異極大（CV% > 20%）

• 可能原因： 加樣時(shí)產(chǎn)生了大量氣泡且未消除；微孔板震蕩混勻不均勻；細(xì)胞在鋪板時(shí)分布不均（貼壁細(xì)胞聚團(tuán)）。

• 解決方案： 降低移液器的退吸速度，或使用反向移液法減少氣泡；確保微孔板在振蕩器上放置平穩(wěn)；在鋪板前使用胰酶充分消化細(xì)胞，并用移液槍反復(fù)吹打制成真正的單細(xì)胞懸液。

問(wèn)題四：標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)線(xiàn)性關(guān)系變差

• 可能原因： 螢光素酶濃度過(guò)高，發(fā)生了底物耗盡（Substrate depletion）；或者檢測(cè)試劑過(guò)期失效。

• 解決方案： 對(duì)高表達(dá)的樣本進(jìn)行梯度稀釋后重測(cè)；在檢測(cè)高濃度樣本時(shí)，適當(dāng)增加 ONE-Glo™ Reagent 的加入量；檢查試劑的有效期及儲(chǔ)存溫度。

問(wèn)題五：背景孔（Blank）讀數(shù)異常偏高

• 可能原因： 微孔板潔凈度不夠，有還原性物質(zhì)殘留；發(fā)光檢測(cè)儀的光路系統(tǒng)受到污染；或者 Buffer 受到熒光素酶的污染。

• 解決方案： 使用全新的無(wú)菌微孔板；定期清潔和維護(hù)讀板機(jī)；確保 ONE-Glo™ 試劑瓶瓶口潔凈，取用后立即封口。

問(wèn)題六：不同批次試劑之間存在系統(tǒng)誤差

• 可能原因： 不同批次間的底物活性存在微小統(tǒng)計(jì)學(xué)波動(dòng)；或者實(shí)驗(yàn)操作人員發(fā)生了變動(dòng)。

• 解決方案： 在進(jìn)行跨批次的大規(guī)模篩選實(shí)驗(yàn)時(shí)，務(wù)必在各批次中加入相同的質(zhì)控品（Control），以便在后期數(shù)據(jù)分析時(shí)進(jìn)行歸一化處理。

問(wèn)題七：試劑在低溫下出現(xiàn)結(jié)晶或沉淀

• 可能原因： ONE-Glo™ Buffer 中含有高濃度的鹽類(lèi)或緩沖成分，在低溫冷凍下溶解度下降，屬于正常的物理現(xiàn)象。

• 解決方案： 將試劑瓶取出，置于室溫下自然回溫，并輕輕搖晃，待結(jié)晶全溶解、溶液變澄清后即可正常使用，不影響性能。

問(wèn)題八：讀數(shù)時(shí)出現(xiàn)明顯的雙峰或信號(hào)延遲

• 可能原因： 發(fā)光檢測(cè)儀的參數(shù)設(shè)置不當(dāng)（如延遲時(shí)間 Delay Time 設(shè)置過(guò)長(zhǎng)或過(guò)短）；或者裂解過(guò)程不徹。

• 解決方案： 優(yōu)化儀器參數(shù)，通常 Delay Time 設(shè)為 0 或 1 秒，Integration Time 設(shè)為 0.5 至 1 秒；延長(zhǎng)微孔板的搖勻時(shí)間，確保細(xì)胞充分裂解。

問(wèn)題九：細(xì)胞在加樣后大量漂浮或脫壁

• 可能原因： ONE-Glo™ 試劑中的去污劑濃度對(duì)某些極度脆弱的細(xì)胞系（如原代神經(jīng)元細(xì)胞、懸浮淋巴細(xì)胞）來(lái)說(shuō)略高，導(dǎo)致膜結(jié)構(gòu)瞬間崩解。

• 解決方案： 嘗試用無(wú)血清培養(yǎng)基 1:1 稀釋 ONE-Glo™ Reagent 后再加入孔中；或者在加樣前先棄去大部分培養(yǎng)基，保留極少量液體作為緩沖。

問(wèn)題十：長(zhǎng)時(shí)間（>2小時(shí)）孵育后信號(hào)急劇下降

• 可能原因： 雖然 ONE-Glo™ 穩(wěn)定性佳，但在高溫（>30°C）環(huán)境下，或者底物濃度被極度稀釋時(shí)，仍可能發(fā)生緩慢降解。

• 解決方案： 盡量在室溫（20-25°C）環(huán)境下進(jìn)行操作；如果需要極長(zhǎng)的孵育時(shí)間，建議分批上機(jī)檢測(cè)，每次只拿出當(dāng)前要測(cè)的板子。

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