產(chǎn)品名稱:Coelenterazine f 腔腸素f

品牌：nanolight

貨號(hào)：

CAT#345腔腸素 F

腔腸素F是優(yōu)選的底物 為 水母發(fā)光蛋白

 

 

• 腔腸素f詳細(xì)信息：

包裝內(nèi)容：

500 ugs – 1 瓶 500 ugs 凍干 CTZ-f 
1 mgs – 2 瓶 500 ugs 凍干 CTZ-f 
5 mgs – 1 瓶 5 mg 凍干 CTZ-f 
10 mgs – 2 瓶 5 mg 凍干 CTZ-f

好處

• 為每組實(shí)驗(yàn)預(yù)先分裝少量新鮮底物
• 保質(zhì)期長（在氬氣下包裝）
• 由于其精細(xì)的晶體結(jié)構(gòu)，溶解速度更快
• 等分試樣之間的質(zhì)量一致

熒光素以過濾、凍干、批次控制的底物形式運(yùn)輸

• 腔腸素f產(chǎn)品信息

  背景描述

  腔腸素（Coelenterazine）是自然界中資源豐富的天然熒光素，是絕大多數(shù)海洋發(fā)光生物（超過75%）的光能貯存分子。腔腸素可作為許多熒光素酶的底物，比如海腎熒光素酶（Rluc），Gaussia分泌型熒光素酶（Gluc），以及包括水母發(fā)光蛋白（aequorin）和藪枝螅發(fā)光蛋白（Obelia）在內(nèi)的光蛋白（Photoproteins）。其發(fā)光原理是：以腔腸素為底物的熒光素酶在有分子氧的條件下，氧化腔腸素，產(chǎn)生高能量的中間產(chǎn)物，并在此過程中發(fā)射藍(lán)色光，峰值發(fā)射波長約為450~480nm。

  腔腸素作為水母發(fā)光蛋白復(fù)合物（Aequorin）的組成成分，只有與鈣離子（Ca2+）結(jié)合后，才能被氧化生成高能量產(chǎn)物Coelenteramide，同時(shí)釋放出CO2和藍(lán)色熒光（~466nm）（圖1）。其具有以下幾個(gè)優(yōu)點(diǎn)：1）能檢測較大范圍的Ca2+濃度（0.1-100μM）；2）樣品無自體熒光，背景熒光較低，盡管信號(hào)較熒光鈣離子指示劑弱，但信噪比更高，因此具有較高靈敏度；3）Aequorin能夠穩(wěn)定維持在細(xì)胞內(nèi)，能夠進(jìn)行數(shù)小時(shí)至數(shù)天Ca2+的監(jiān)測。

  

  圖1. 腔腸素作為水母發(fā)光蛋白輔助因子的Ca2+依賴反應(yīng)流程

  腔腸素具有能量轉(zhuǎn)移（Bioluminescence Resonance Energy Transfer，BRET）的特性：在底物腔腸素存在的情況下，熒光素酶（如Rluc）催化底物發(fā)生藍(lán)光，能量轉(zhuǎn)移到EYFP（增強(qiáng)的黃色熒光蛋白），發(fā)出綠光（~530nm）。通過Rluc融合蛋白和EYFP融合蛋白兩者間的相互關(guān)系研究蛋白-蛋白之間的相互作用。BRET的信號(hào)可通過比較綠光和藍(lán)光的量來進(jìn)行測定，消減了因細(xì)胞數(shù)、細(xì)胞類型和其他實(shí)驗(yàn)變量而引起的數(shù)據(jù)變量。

  主要應(yīng)用

  1. 活體成像。

  2. 報(bào)告基因檢測。

  3. 檢測細(xì)胞/組織內(nèi)活性氧（ROS）水平：細(xì)胞和組織內(nèi)的超氧陰離子和過氧化亞硝基陰離子能夠增強(qiáng)腔腸素在酶非依賴性的氧化體系中自發(fā)熒光。

  4. 高通量篩選。

  5. 監(jiān)測活細(xì)胞內(nèi)鈣離子水平。

  產(chǎn)品描述

  腔腸素f（Coelenterazine f）系天然腔腸素衍生物，是水母發(fā)光蛋白的優(yōu)先選擇的底物。腔腸素f與天然腔腸素結(jié)構(gòu)上的差別在于氟（F）原子替換R-1位酚基上的羥基。腔腸素f和水母蛋白被氧化后活化，生成腔腸素的亞穩(wěn)態(tài)復(fù)合物。該復(fù)合物生成時(shí)間非常短，而天然腔腸素-水母蛋白復(fù)合物的生成反應(yīng)很慢（60min內(nèi)僅有40%的天然腔腸素完成反應(yīng)）。與天然腔腸素-水母蛋白復(fù)合物產(chǎn)生的光子總數(shù)相比，此復(fù)合物僅產(chǎn)生80%的光子能。

  腔腸素f與Ca2+接觸時(shí)，可快速且高產(chǎn)量的發(fā)光，產(chǎn)能強(qiáng)度是天然腔腸素的20倍。同時(shí)，腔腸素f具有良好細(xì)胞滲透性。當(dāng)需要*的Ca2+檢測靈敏度來研究水母蛋白再生實(shí)驗(yàn)時(shí)，推薦使用本底物。

  產(chǎn)品性質(zhì)

  英文別名（English synonym）	CLZ-F; CLZN-F; Coelenterazine-Fluoride
  CAS號(hào)（CAS NO.）	123437-16-1
  分子式（Formula）	C26H20FN3O2
  分子量（Molecular weight）	425.46g/mol
  外觀（Appearance）	黃色至褐色粉末
  溶解性（Solubility）	溶于甲醇或者乙醇，不可溶于DMSO
  純度（Purity）（TLC）	>95%
  結(jié)構(gòu)（Structure）

  運(yùn)輸和保存方法

  冰袋運(yùn)輸。粉末-20℃避光干燥保存，最好保存在惰性氣體環(huán)境下，避免接觸空氣。

  腔腸素f工作液的配制

  腔腸素f溶解：不溶于水。毒性低的溶劑是100%乙醇，可配制濃度為0.1-1mg/ml。加入pH低于7.0的酸性緩沖液（堿性pH會(huì)快速降解底物）稀釋成低濃度工作液。切忌溶于DMSO。

  腔腸素f保存：建議溶液現(xiàn)配現(xiàn)用！體外實(shí)驗(yàn)，需將稀釋后的工作液室溫放置20-30min，方可穩(wěn)定工作。該工作液可室溫穩(wěn)定放置3-4h，有非常微弱的信號(hào)衰減發(fā)生。不建議儲(chǔ)存液-20℃或更低溫度保存，因?yàn)槠涓吣芰康亩醐h(huán)丁酮結(jié)構(gòu)即使在低溫的情況下也會(huì)發(fā)生降解，導(dǎo)致熒光強(qiáng)度明顯變?nèi)?。短時(shí)間保存條件：-70℃避光保存于塑料管內(nèi)（溶液中不含有Ca2+），且有惰性氣體保護(hù)。

  注意事項(xiàng)

  1. 粉末最好使用惰性氣體（氮?dú)饣驓鍤猓?，在密封良好的塑料管中避光保存?20℃，長期保存于-70℃。管內(nèi)即使存在少量空氣，可能造成腔腸素n氧化失活，造成在不同試驗(yàn)間的量化分析結(jié)果無法比較。

  2. 本品接觸空氣，水或者任何氧化試劑會(huì)不穩(wěn)定。

  附錄1. 腔腸素及其衍生物的特性

  產(chǎn)品名稱	基本描述
  天然腔腸素 Coelenterazine native	水母發(fā)光蛋白的輔助因子，高靈敏度化學(xué)發(fā)光法檢測Ca2+濃度（0.1~100µM）。常用作Rluc和Gluc等熒光素酶的報(bào)告基因檢測底物。BRET分析，以及細(xì)胞/組織樣本中的超氧陰離子和過氧化亞硝基陰離子的化學(xué)發(fā)光檢測?？焖僭偕芰Ρ容^重要的實(shí)驗(yàn)推薦使用本底物。
  腔腸素h Coelenterazine h	一種水母發(fā)光蛋白復(fù)合物，其發(fā)光強(qiáng)度比天然腔腸素高10倍以上。適用于報(bào)告基因分析。
  腔腸素hcp Coelenterazine hcp	腔腸素hcp-水母發(fā)光蛋白復(fù)合物的熒光強(qiáng)度比天然腔腸素復(fù)合物高190倍，且量子產(chǎn)量高和Ca2+反應(yīng)速度快。
  腔腸素cp Coelenterazine cp	Coelenterazine cp 光蛋白復(fù)合物的發(fā)光強(qiáng)度是天然腔腸素的15倍，且具有更快的Ca2+反應(yīng)性。
  腔腸素f Coelenterazine f	腔腸素f-光蛋白復(fù)合物的發(fā)光強(qiáng)度是天然腔腸素的20倍。其具有良好的細(xì)胞滲透性。當(dāng)需要*的檢測Ca2+靈敏度研究水母蛋白再生實(shí)驗(yàn)研究中，推薦使用本底物。
  腔腸素n Coelenterazine n	所有的腔腸素衍生物中熒光強(qiáng)度是最弱的，且對(duì)Ca2+反應(yīng)速率也明顯低于天然腔腸素。非常有用的Ca2+低靈敏檢測底物。
  腔腸素e Coelenterazine e	具有最高的體外水母發(fā)光蛋白反應(yīng)性，且具有雙發(fā)射峰，可在pCa5-7范圍內(nèi)通過雙波長的比例測定Ca2+濃度，從而提高檢測精確性。腔腸素e的熒光強(qiáng)度是天然腔腸素的137%。
  2-methyl Coelenterazine 二甲基腔腸素	可高效作用于ROS（如單態(tài)氧、超氧陰離子），是一種已報(bào)道的強(qiáng)抗氧化劑。
  腔腸素 400a Coelenterazine 400a	BRET研究中Rluc的優(yōu)選底物。在390nm和400nm之間發(fā)藍(lán)色光，對(duì)GFP受體蛋白的光發(fā)射干擾最小。不可作為Gluc底物。
  RLC=相對(duì)發(fā)光容量：相對(duì)于天然aequorin，飽和Ca2+中aequorin的總時(shí)間積分發(fā)射=1.0 **Half-Rise Time：Half-Rise Time是將1mmCa2+添加到用所需的克倫他嗪類似物重建的aequorin標(biāo)準(zhǔn)中后，發(fā)光信號(hào)達(dá)到最大值50%的時(shí)間。 所有數(shù)據(jù)都來自 O. Shimomura in Cell Calcium 14, 373 (1993).

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