sinobiological STF02說(shuō)明書

Sinofection Transfection Reagent

Cat: STF02

中轉(zhuǎn)簡(jiǎn)介

Sinofection是一種基于陽(yáng)離子聚合物的優(yōu)異轉(zhuǎn)染試劑。它已成功應(yīng)用于各種細(xì)胞系的各種規(guī)模的轉(zhuǎn)染。與市場(chǎng)上*的轉(zhuǎn)染試劑相比，Sinfection具有更高的蛋白表達(dá)水平和更低的細(xì)胞毒性。它是用于瞬時(shí)和穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的重組蛋白生產(chǎn)的理想選擇。它與血清，細(xì)胞類型，規(guī)模和儲(chǔ)存溫度的廣泛兼容性為您提供了研究和生產(chǎn)的便捷和保證。

特征

• 出色的蛋白質(zhì)表達(dá)
• 粘附細(xì)胞和懸浮細(xì)胞的出色轉(zhuǎn)染，可用于多種細(xì)胞系
• 從微量滴定板到生物反應(yīng)器，DNA轉(zhuǎn)染（瞬時(shí)/穩(wěn)定）的顯著應(yīng)用
• 簡(jiǎn)單快速的程序
• 低細(xì)胞毒性

-優(yōu)質(zhì)的蛋白表達(dá)

事實(shí)證明，與*競(jìng)爭(zhēng)對(duì)手的產(chǎn)品相比，Sinfection的轉(zhuǎn)染可在多種細(xì)胞系中提供更高水平的蛋白質(zhì)表達(dá)。對(duì)于大規(guī)模生產(chǎn)重組蛋白，Sinfection是實(shí)現(xiàn)適產(chǎn)量的宜選擇。此外，Sinfection還具有很高的轉(zhuǎn)染效率，可確保成功進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

圖1在9個(gè)細(xì)胞系中比較了使用Sinfection和其他競(jìng)爭(zhēng)者進(jìn)行瞬時(shí)轉(zhuǎn)染的蛋白表達(dá)水平，其中6個(gè)顯示出被Sinfection（A?F）轉(zhuǎn)染的優(yōu)異結(jié)果。通過(guò)ELISA測(cè)定法確定蛋白質(zhì)表達(dá)水平。競(jìng)爭(zhēng)對(duì)手轉(zhuǎn)染試劑的轉(zhuǎn)染遵循制造商的規(guī)程。

-貼壁細(xì)胞和懸浮細(xì)胞的出色轉(zhuǎn)染，適用于多種細(xì)胞系

-從微量滴定板到生物反應(yīng)器的規(guī)模上，DNA轉(zhuǎn)染（瞬時(shí)/穩(wěn)定）的顯著應(yīng)用

通過(guò)Sinfection在96孔板中的0.1mL到生物反應(yīng)器中的50L的各種規(guī)模的瞬時(shí)或穩(wěn)定轉(zhuǎn)染，已經(jīng)成功表達(dá)了數(shù)百種重組抗體和蛋白質(zhì)。在所有規(guī)模的轉(zhuǎn)染應(yīng)用中使用Sinofection，將在很大程度上節(jié)省研究和生產(chǎn)成本。

-操作簡(jiǎn)便快捷

1，轉(zhuǎn)染規(guī)程（35mm培養(yǎng)皿）：

（1）細(xì)胞的制備

• 貼壁細(xì)胞
  • 轉(zhuǎn)染前一天，每35毫米培養(yǎng)皿將0.2–2×10 6個(gè)細(xì)胞置于培養(yǎng)基中。在37°C（5％CO 2）下孵育過(guò)夜。轉(zhuǎn)染前細(xì)胞的融合度應(yīng)為50–80％。
• 懸浮細(xì)胞
  • 在35毫米培養(yǎng)皿中以5×10 4 / mL到1×10 6 / mL 的密度將2 mL新鮮傳代的細(xì)胞平板接種。轉(zhuǎn)染時(shí)，懸浮細(xì)胞應(yīng)處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。在37°C（5％CO 2）下孵育細(xì)胞過(guò)夜。細(xì)胞數(shù)取決于您的需要和要轉(zhuǎn)染的細(xì)胞類型。

（2）Sinfection＆DNA復(fù)合物的制備

用適當(dāng)?shù)南♂寗ㄈ鏟BS，NaCl溶液，葡萄糖溶液，DMEM，有或無(wú)血清的等滲溶液）稀釋DNA，以等滲形式稀釋至濃度為20μg/ mL（建議優(yōu)化），總體積為250μL。

在250μL培養(yǎng)基中稀釋適量的Sinofection。

將稀釋的DNA與稀釋的Sinofection混合（總體積= 500μL）。輕輕混合并在室溫下孵育20分鐘（溶液可能看起來(lái)混濁）。

（3）轉(zhuǎn)染

將500μL復(fù)合物逐滴添加至細(xì)胞和培養(yǎng)基中。輕輕晃動(dòng)培養(yǎng)皿或孔，以確保均勻分布。

在蛋白質(zhì)表達(dá)測(cè)定之前，將細(xì)胞在37°C的CO 2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)18-48小時(shí)（通常在72小時(shí)后達(dá)到高表達(dá)）。

2，轉(zhuǎn)染方案（瓶）：

轉(zhuǎn)染細(xì)胞以表達(dá)蛋白質(zhì)此協(xié)議通常用于將DNA轉(zhuǎn)染到培養(yǎng)在燒瓶中的293 EBNA或CHO細(xì)胞中。使用前使用無(wú)菌DNA或?qū)NA進(jìn)行過(guò)濾滅菌（過(guò)濾后重新定量DNA）。

所有量均以每瓶為基礎(chǔ)，在125 mL搖瓶中培養(yǎng)30 mL；有關(guān)其他格式，請(qǐng)參見表2。按比例放大或縮小轉(zhuǎn)染。

表2.使用Sinfection擴(kuò)大或縮小轉(zhuǎn)染。注意：實(shí)際條件應(yīng)通過(guò)實(shí)驗(yàn)優(yōu)化。

1. 以0.3×10 5細(xì)胞/ mL的速率通過(guò)293細(xì)胞，以175 rpm的速度搖動(dòng)。72小時(shí)后，將細(xì)胞稀釋至1.0×10 6細(xì)胞/ mL，以175 rpm搖動(dòng)。4小時(shí)后轉(zhuǎn)染。
2. 以0.3×10 5細(xì)胞/ mL的速度通過(guò)CHO細(xì)胞，以175 rpm的速度搖動(dòng)。48小時(shí)后，將細(xì)胞稀釋至1.0×10 6細(xì)胞/ mL，以175 rpm搖動(dòng)。4小時(shí)后轉(zhuǎn)染。
3. 用適當(dāng)?shù)南♂寗ɡ绾琈g 2+的 PBS ，150 mM NaCl，300 mM葡萄糖，有或無(wú)血清的DMEM培養(yǎng)基）稀釋稀釋所需的質(zhì)粒DNA量。在室溫下孵育5分鐘。將所需的Sinfection體積添加到稀釋的DNA中，并輕輕混合以確?？傮w積為1.5?3 mL。
4. 在室溫下將混合物孵育10-20分鐘，以形成復(fù)合物。孵育時(shí)間不要超過(guò)20分鐘。
5. 向裝有細(xì)胞的125mL燒瓶中緩慢加入1.5?3 mL DNA-脂質(zhì)混合物，同時(shí)緩慢搖動(dòng)燒瓶。
6. 對(duì)于293細(xì)胞和CHO細(xì)胞，將轉(zhuǎn)染的細(xì)胞培養(yǎng)物在設(shè)置為175 rpm的定軌振蕩器上于37°C，8％CO 2孵育。

-低細(xì)胞毒性

Sinofection顯示出極低的細(xì)胞毒性，該毒性已通過(guò)內(nèi)部WST-8測(cè)定法針對(duì)每批進(jìn)行測(cè)試和驗(yàn)證。WST-8測(cè)定基于線粒體脫氫酶對(duì)水溶性四氮唑（WST）的比色還原

甲dye染料溶液的吸光度與活細(xì)胞數(shù)成正比。與常用的WST-1方法相比，WST-8測(cè)定的靈敏度更高，而甲dye染料的溶解度和穩(wěn)定性更好。

圖3.分別用L2K和Sinfection轉(zhuǎn)染的HeLa細(xì)胞和DG44細(xì)胞的顯微鏡比較。按照制造商的建議進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

圖4. Sinofection和L2K對(duì)4種細(xì)胞系的細(xì)胞毒性比較。按照制造商的建議進(jìn)行轉(zhuǎn)染。

質(zhì)量控制

• 轉(zhuǎn)染效率：
  • Sinofection已針對(duì)293E細(xì)胞株進(jìn)行了大量測(cè)試，以確保一致性和有效性。使用2.8μL的Sinofection，用0.6μg的rhFc表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染24孔板中的85％融合293E細(xì)胞。
• 無(wú)菌性：
  • Sinofection在無(wú)菌條件下生產(chǎn)和包裝，并通過(guò)0.22μm無(wú)菌過(guò)濾器過(guò)濾，用于后一步。
• 細(xì)胞毒性：
  • 通過(guò)內(nèi)部WST-8分析評(píng)估Sinfection的細(xì)胞毒性。

使用指南

• 應(yīng)用：
  • 重組蛋白/抗體的表達(dá)與純化
  • 功能基因研究
  • 功能蛋白研究
  • 基因治療
  • 轉(zhuǎn)基因動(dòng)物模型
• 存儲(chǔ)：
  • Sinofection可以在2℃-8℃下保存兩個(gè)月，而沒(méi)有發(fā)現(xiàn)活性下降?？贵w產(chǎn)品自收到之日起在-20℃至-70℃下保存可穩(wěn)定十二個(gè)月。耐受凍融循環(huán)。